检测步骤: 1. 将所有试剂恢复至室温,倒转混匀所有试剂。 2. 1份4倍浓缩的样品稀释液加3份去离子水,混匀。例如,30ml 4倍浓缩的样品稀释液加入90ml去离子水。 3. 1份20倍浓缩的洗液加入19份去离子水稀释,混匀。例如,25ml 20倍浓缩的洗液加入475ml去离子水。 4. 稀释前摇匀对照样品和待测样品。 5. 稀释阴性对照、阳性对照和待测样品,稀释比例为每2μl样品加800μl样品稀释液。吹吸4次混匀。 6. 向两孔加入100ul稀释后的阴性对照,向另外两孔加入100ul稀释后的阳性对照,其余每孔加入100ul稀释后的待测样品。室温放置30min。 7. 倒空板内液体,每孔用300μl洗液洗涤,弃去,在纸巾上拍干。再重复上述操作两次。洗涤过程中勿让酶标板干燥。 8. 每孔立即加入100μl 酶标结合物,室温放置30min。 9. 洗板,重复步骤7。 10. 每孔立即加入100μl底物,室温放置30min。 11. 不要倒掉板内液体,每孔立即加入100μl终止液。 12. 用双波长的酶标仪测定OD值。用405nm或410nm作为主要吸收波长,630nm或650nm作为参考吸收波长。 质量控制 1. 每次试验应该包含阳性对照和阴性对照 2. 阳性对照的平均值减去阴性对照的平均值必须大于等于0.7 3. 阴性对照的平均值必须小于0.4OD 4. 如有上述标准有一条不符合,试验是无效的,必须重新进行试验 计算结果 Sp= ELISA单位(EU)=Sp×100 阳性对照的设为100EU ELISA单位的解释 AIV ELISA值 解释 小于5 EU IBD抗体阴性 大于5 EU IBD抗体阳性